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液相色譜高壓輸液系統由溶劑貯存器、高壓泵、梯度洗脫裝置和壓力表等組成。

一、 溶劑貯存器
溶劑貯存器一般由玻璃、不銹鋼或氟塑料制成,容量為1~2L，用來貯存足夠數量、符合要求的流動相。

二、 高壓輸液泵
高壓輸液泵是高效液相色譜儀中關鍵部件之一，其功能是將溶劑貯存器中的流動相以高壓形式連續不斷地送入液路系統，使樣品在色譜柱中完成分離過程。
高壓輸液泵通常有恒流泵額恒壓泵
1.恒流泵
恒流泵又稱機械泵，分機械注射泵和機械往復泵，其中機械往復泵應用最多。
2.恒壓泵
能保持輸出壓力恒定，但輸出流量隨色譜系統阻力的變化而變化，保留時間重視性差。
目前，恒流泵正逐漸取代恒壓泵。

梯度洗脫裝置
梯度洗脫裝置分為兩類：一類是外梯度裝置（又稱低壓梯度），流動相在常溫常壓下混合，用高壓泵壓至柱系統，需一臺泵即可。另一類是內梯度裝置（又稱高壓梯度），將兩種溶劑分別用泵增壓后，按電器部件設置的程序，注入梯度混合室混合，再輸至柱系統。
梯度洗脫就是在分離過程中使兩種或兩種以上不同極性的溶劑按一定程序連續改變它們之間的比例，從而使流動相的強度、極性、pH值或離子強度相應地變化，達到提高分離效果，縮短分析時間的目的。

梯度洗脫裝置的四種分類：
1.線性梯度
在某一段時間內連續而均勻地增加流動相強度。
2.階梯梯度
流動相強度從低強度直接改變為較高強度。
3.高壓梯度
利用兩臺高壓輸液泵，將兩種不同極性的溶劑按一定比例送入梯度混合室，混合后進入色譜柱。兩種溶液在高壓下混合。
4.低壓梯度
使用一臺高壓輸液泵，通過比例調節閥將兩種或多種不同極性的溶劑按一定的比例抽入高壓輸液泵中，溶液在常壓（低壓）下混合。
優點是使用一臺高壓輸液泵，成本低；能實現二元以上梯度洗脫。
缺點是常壓下混合往往容易形成氣泡，通常需要配置在線脫氣裝置；濃度梯度范圍較高壓梯度窄。
液相色譜儀相關知識

　　液相色譜法是分析化學中發展最快、應用最廣的一種分析方法，特別是高效液相色譜儀已經成為生命科學、材料科學、環境科學等方面必不可少的重要檢測方法?，F代科學技術的發展使得分析對象越來越復雜，分析要求越來越高，液相色譜的強大功能使其成為新世紀中解決生命科學、材料科學、環境科學等復雜體系發現難題的最有力的技術和方法。

　　高效液相色譜儀是在經典液相色譜的基礎上，引入氣相色譜的理論和技術而發展起來的。在高效液相色譜中，流動相與組分之間有一定的親和力，分離過程的實現是組分、流動相和固定相三者間相互作用的結果，分離不但取決于組分和固定相的性質，還與流動相的性質密切相關，一般情況下，高效液相色譜儀的分析可在室溫下進行，由于采用顆粒極細的固定相，柱內壓降很大，加上流動相黏度高，因此必須采用高入口壓，以此來維持一定的流動相線速。高效液相色譜儀對于揮發性低、熱穩定性差、分子量大的物質特別有利，它在醫藥、生化等方面具有非常重要的作用。

　　色譜柱的常見問題：

　　1.色譜柱污染：

　　目前,基層實驗室多采用反相色譜柱,要減少色譜柱的污染最有效的辦法是要純化樣品。凡是樣品純化得越干凈,色譜柱的壽命就越長;反之,只有提取沒有純化的樣品,色譜柱柱效就會大幅下降。一般來說,要提取純化好的樣品,最好的方法是用流動相溶解樣品,這樣,一方面能減少色譜圖中的溶劑峰干擾,另一方面也能檢查樣品在流動相中的溶解性。如果樣品進樣后在流動相中沉淀,會堵塞進樣器和柱頭,甚至樣品分解,出現鬼峰。如果出現樣品與流動相不溶要設法改變溶解條件,可更換樣品溶劑,或改進樣品純化處理的方法,或濾過去除不溶性物質。

　　2.色譜柱阻塞與對策

　　如果配有保護柱,應先去掉保護柱進行分析。如果色譜柱阻塞,可進行反沖洗。如果問題仍然存在,色譜柱可能被強保留的污染物損壞,建議使用恰當的再生程序。如果問題仍然存在,可能是進口阻塞,更換入口處的篩板或更換色譜柱。如果必要,亦可更換色譜柱。

　　3.嚴格清場

　　清洗的過程是延長色譜柱壽命的關鍵,每次分析工作結束時,要做好清場工作。如果流動相是緩沖鹽,先用5%甲醇水沖洗30 min以上；如果流動相是離子對,先用50%甲醇水沖洗30 min以上；如果流動相是酸性溶劑,先用純水沖洗30 min以上,流速0.5 mL#min-1,最后過度到用色譜甲醇沖洗色譜柱,目的是沖去吸附在柱上的強保留組分。如果用甲醇-水為流動相也應這樣沖洗色譜柱,在一定程度上可恢復柱效。

液相色譜儀 液相色譜儀 液相色譜儀相關知識_液相色譜儀

使用液相色譜儀的小伙伴肯定會遇到漏氣和漏液的狀況，流動相是造成液相色譜各種問題的主要源頭。液相色譜常見的故障一是堵，二是漏。今天就這兩部分別展開討論(流動相以甲醇為例，色譜柱以C18為例) 。

惠州市華高儀器設備有限公司

查堵

首先，為何會堵？“堵”的表現現象就是柱壓異常升高，直接原因就是流路不暢。堵塞的主要位置就是在色譜柱的前端，主要原因就是流動相里有雜質，雜質的主要來源就是細菌。

液相色譜儀

1、純水中的細菌污染

首先我們要認識到，一般的國產甲醇其實不需要額外過濾處理，’華高儀器設備‘直接使用沒有問題。即使是有些固態微粒雜質，也能在液相流路系統前端的過濾頭上排除，真正容易引起問題的，是水中的細菌。新制備的純水在室內放置幾天就會長菌，而這些細菌雖然肉眼不可見，卻足以堵塞柱填料顆粒的空隙，造成柱子很快報廢。這就是在配制流動相時造成的細菌污染的原因，解決它的方法很簡單，就是確保水的可靠性。

解決辦法：

(1)理想的方式當然是購買實驗室專用純水機，既方便又可靠，質量也放心。

(2)成箱購買市售品牌純凈水，如500ml的怡寶或娃哈哈，這些水的質量足以應付液相色譜的要求。先隨機抽取一瓶做一下細菌平板實驗，待菌落數合格方可使用。這樣每次只要單獨開一瓶即可，也很方便。每次成本2元左右。這里特別指出一個細節：在絕大多數書本上，凡談到配制流動相都會談到后一個過濾的步驟。但是從我們長期使用的

 

 

實際效果來說，只要能保證水的質量，這一步完全可以也應當去除。

水有保證，可以不過濾？

(1)流動相過濾在理論上有好處，但是實際操作時由于不可能做到專瓶專用，反而容易造成的交叉污染，對于配比復雜的流動相影響更大。

(2)流動相過濾在經濟成本上不劃算。買一套過濾裝置要6000多元，且過濾器公認是比較容易損壞的設備。主要是過濾片的成本太高，一片就要幾十元。按一般液相柱的正常使用壽命計算，過濾片的成本會遠遠高于色譜柱的成本上升。

2、流動相的細菌污染

流動相剛開始不長菌，在使用時卻產生了細菌污染。這主要是在使用多元液相色譜儀時的一種不良使用習慣造成的。舉簡單的例子：50%的甲醇水流動相，有兩種使用方式。一種方式是在上機前就配好混合在一起，另一種方式是在流路A放純甲醇，流路B放純水。從單純實驗效果來說，后一種有明顯的優點：首先是簡單，不需要實驗者另個計算配比混合，其次就是比例準確，能得到保留時間重復性極好實驗效果。

但是，它有一個致命的缺陷，就是純水在流動相瓶中幾天時間就會長細菌(很多情況下不僅僅用純水作流動相，而是用緩沖鹽溶液，本身就是肥料，細菌長得更迅速)，一旦有細菌柱子就壞得很快。所以這種方式要求操作人員每次實驗都要用新制備的純水，更要求在每次實驗后把水相換掉，換成甲醇沖洗干凈，這一點在實際工作中很多人意識不強，就是意識到了但多次使用中總有一兩次會遺漏，但是往往這一兩次就足以產生致命的影響。因為液相色譜柱的堵塞是不可逆的。

所以，寧可犧牲小小的保留時間的重復性，也不要用純水溶液作為流動相。從實際實驗效果來說，我建議用10%的甲醇水代替水溶液(以前我做過不同比例甲醇水的細菌總數實驗，在5%就基本可以抑菌，在10%及以上就可以完全殺菌了)，這樣可以有效排除長細菌的隱患，既可作流動相，也可沖柱。就算是在配制流動相時會計算得麻煩一些，但是一次麻煩，終身受益。

3、不適當操作

(1)在更換零件時選擇的型號有誤，接口不是很匹配，在擰緊的時候產生變形而使得管路堵塞。

(2)樣品處理液凈化得不干凈，長期會在六通閥和柱之間形阻塞不暢。

(3)在使用用手動六通閥時，有些人可能由于手勁小的原因，轉動的不到位，于是造成流路形成死堵，壓力快速升高超過警戒值。

(4)在使用金屬管路作出廢液管時，應當注意廢液瓶中先放一些水，并把廢液管的出口端結晶成塊并造成堵塞。這種情況不常見，但卻的確發生過。

4、查堵的方法

在發生“堵”的現象后，就需要找出原因，主要是什么位置發生了“堵”。絕大多數情況下，整個系統只會有一個地方發生堵塞。查堵的方法是從尾向前逆向分段拆開，仔細觀察壓力數值，如果某一個部件(柱子除外)裝上和拆下時的壓力差別很大，可發展變化判斷。至于柱的堵塞，可以通過換同樣規格的柱的壓力是否一致來判斷。

查漏

“漏” 分兩種：漏液和漏氣。漏液，液相色譜儀從流動相瓶到廢液瓶之間的流路是一個全封閉體系，內部壓力很高，但外部卻能保證一滴不漏。如果某個部件發生漏液，那就是故障所在。漏液的原因分兩種：

1、接觸硬件不當

在更換零件如流路管或換柱時，換的接頭接口不匹配，造成漏液。要注意不同公司的柱子接頭很多是不同的，甚至同一家公司在不同時期生產的液相柱接頭也有很大區別。當然選項用PEEK接頭是一較好是一個較好的解決方法，不僅通用性好，而且靠手擰就能保證不漏液。即使是接口本身是匹配的，但是如果操作不當也會漏液，一種不當就是力度把握不好，擰得太緊或太松;

另一種不當就是致命的錯誤：滑絲，這往往是動手能力不太強，螺絲釘很少擰的工作者犯的錯誤，滑絲的后果不僅是漏液那么簡單，常造成重要部件的報廢。解決這個問題只能靠惡補基本功來實驗，那就是擰螺絲。

2、使用儀器不當

只要互相有10%比例就不會出現這個問題。另一原因是在用緩沖液鹽溶液(不論甲醇含量有多少)作流動相時，實驗結束后沒有換甲醇水沖洗，使得微滲的流動相干燥形成晶體造成。不過，輸送泵漏液并不是非得馬上修不可，沖洗干凈并在以后的使用中多加小心一般都可以正常使用。檢測器漏液是個很麻煩的事，一般都是吸收池的問題，更換的費用相當高。但是并不是說一定要馬上更換，還可以從實際實驗效果看能否湊合使用。

漏氣，漏液是從內部向外漏，而漏氣則是外部了的氣體進入液相色譜儀的流路內部形成氣泡。下面按流路的方向逐個部件分析產生氣泡的原因和相應解決方法。

（1）過濾頭

做油液時，在流路管中有不規則但持續的小氣泡產生，這時考慮的是流動相有沒有脫氣(需要特別提醒即使是有了真空脫氣機也是要先超聲脫氣的，起碼可以減少脫氣機的工作壓力并提高工作效率)，如果已脫氣，則要注意過濾頭的污染也會造成這種現象。處理方法比較簡單，擰下過濾頭在稀硝酸中浸泡，超聲半小時，洗凈后裝回去即可。

（2）透明流路管

指的是在過濾頭和輸送泵之間的那一段管路。這一個部分往往不是有點氣泡，而經常是整個管中全是空氣而操作人員卻渾然不知，以致輸送泵工作了半天才發現流動相瓶里的液體一點也沒少。這也是我們常說的液相色譜儀至少一周要開機一次的原因(我們做液相一定要有“微滲”的概論)。如果長時間不用，這一段管路的液體會徹底干掉，而充滿空氣的管路和充滿液體的管路不仔細看是分辨不出來的。這種情況對于輸送泵很危險，因為泵從設計來說是輸送液體而不是輸送氣體，內部的液體對于活塞來說起到了機油的作用，如果活塞桿還殘存了一些緩沖鹽，則極易拉傷，造成不可逆轉的影響。

對于這種情況，要突出“預防為主”如：液相色譜使用人員要相對固定和穩定，工作中合理搭配資源，每臺機一周至少一次實驗，如長期不用起碼每周要沖流動相2小時。養成良好的工作習慣很重要。

如果流路管中真漏氣了怎么辦？

我的建議是用外力使管路中充滿液體。

具體如下：

1、找到流路管進入輸送泵的接頭。

2、擰下來。

3、用一干凈洗耳球的對準管路的平整切口。

4、吸液體，看液面從流動相瓶里上升，至離洗耳球5cm左右時停止該動作。

5、快速把接頭擰回輸送泵上(這個過程可能會有少許流動相外泄，這是正?，F象)。

6、開機，打開排液閥門，啟動輸送泵。

7、等排液管中流出的溶液沒有氣泡時，再關閉排液閥，儀器正常工作。

（3）輸送泵和柱子

這些部分進了氣泡一般不怕，沖掉就行。

（4）檢測器

應該說，整個流路中只要有一個氣泡都會在檢測器上得到強烈的信號反映，檢測器內部的氣泡一般都能被沖走，但也有很難沖掉的殘留氣泡的情況。如果檢測器內有殘留氣泡，會有特別明顯的表現形式，就是在走基線時會時不時間隔出現直上直下信號很大的信號峰。這時先看普通流量能否沖走，如果沖不走，辦法就是拆柱，把檢測器直接連接到輸送泵的出口，加大幾部流量沖洗，則肯定能沖走氣泡。